Пречистването на протеина е процесът на разделяне на протеиновите фракции с конкретна цел от тъкани, клетки или протеинови смеси. Пречистването на протеина трябва не само да насърчава силната чистота на изолирания протеин, но и да поддържа биологичната активност на протеина. Следователно е необходимо да се проектират една или повече комбинирани схеми за пречистване според различни свойства на протеина. Основната стратегия за пречистване на протеини е да се използват приликите и разликите между различните протеини. Въз основа на сходството между протеините може да се отстрани непротеиновият материал и тогава целевият протеин може да бъде разделен въз основа на протеиновите разлики. Особено с бързото развитие на технологията на генетичното инженерство, въпреки че много протеини се експресират чрез генетична рекомбинация, нивото на пречистване на протеина е пряко свързано с чистотата и активността на протеина. Следователно пречистването на протеини остава важна тема в съвременните биотехнологии.
Цел
От една страна, изолирането и пречистването на протеините са особено важни за задълбоченото изследване на структурата и функцията на протеините, а от друга страна, разделянето и пречистването на протеините също са пряко свързани с ефекта на прилагането на протеините. Следователно пречистването на протеини играе важна роля в изследването и прилагането на биологичната наука, а технологията за разделяне и пречистване на протеини също е ключова технология в биологичната индустрия.
Пътят
Принципът на пречистване на протеини е да се отдели целевият протеин с разумна ефективност, скорост, добив и чистота, като същевременно се поддържа биологичната му активност и химическата цялост. Основните стъпки включват селекция от експериментални материали, предварителна обработка, екстракция на протеини, класификация на суров протеин, класификация на фини протеини и идентификация на протеини.
Процесът на пречистване трябва да обърне внимание на: 1, за да се сведе до минимум въздействието върху активността на протеина, като на това да се предотврати твърде високо или твърде ниско pH, висока температура и тежки метални ефекти; 2. Работете при ниска температура; 3. Опитайте се да запазите водещото ниво на съдържание на протеини в пробата.
Класификация на
Пречистването на протеина може да бъде класифицирано според вида на метода на пречистване:
I. Метод на валежи, включително отлагане на сол, използване на солни йони за унищожаване на втвърдения слой върху повърхността на протеина, излагане на хидрофобната област и след това отлагане за постигане на целта на предварително пречистване; Органичното отлагане, използвайки органични разтворители за намаляване на водната активност, унищожава коагулирания филм върху протеиновата повърхност, което води до утаяване на протеини. Валежите са лек метод за пречистване, но чистотата не е висока и може да се използва като първичен процес на пречистване.
ДВЕ, Диализен метод, включително диализна торбичка и метод на ултрафилтрация. Чрез диализа и ултрафилтрация могат да бъдат елиминирани малки молекулни примеси и протеиновият разтвор също може да бъде заменен.
3. Хроматографските методи включват гел хроматография на молекулярна сито, йонна обменна хроматография, афинитетна хроматография (хроматография на метален хелатен афинитет, протеин A/G хроматография, рецепторна протеин, субстрат и др.), Хидрофобна хроматография, обратна хроматография и високоефективна течна хроматография. За да се постигнат по -добри резултати, често се изисква комбинация от два хроматографски метода, като афинитетна хроматография и йонна обменна хроматография.
В допълнение към горните методи има много други методи за пречистване, като центрофугиране на градиент на плътност, които са подходящи за производството на протеини с висока чистота, но изискват по-високи експериментални условия. Протеиновите кристали са подходящи за анализ на биологична структура, като X-трансмисия.
Време за публикация: 2025-07-01