Някои въпроси и отговори за разтворимостта на модифицираните пептиди

1. Какви примеси има в пречистените от HPLC?

A: Модифициран пептид и немодифицирани пептидни примеси в суров и обезсобен модифициран пептид: като модифициран пептид с дължина, която не е пълна, и някои суровини като DTT, TFA и др.

2. Какви примеси се пречистват от HPLC?

О: Модифицираният пептид, пречистен от HPLC, все още ще има много примеси, а примесите обикновено са къси пептиди и малко TFA.

3. Колко време е подходящо?

О: Синтезът на модифициран пептид трябва да отчита дължината на модифицирания пептид, заряд, хидрофилност и хидрофобност и други фактори. Колкото по -дълга е общата дължина, толкова по -ниска е чистотата и добива на суровия продукт и толкова по -голяма е трудността на пречистване и вероятността от трудност в синтеза. Въпреки това, няма начин да се промени последователността на функционалния домейн на модифицирания пептид, но за да се завърши синтеза на модифицирания пептид, понякога могат да се добавят само някои спомагателни аминокиселини в горния и надолу по течението на функционалния домен, за да се подобри разтворимостта и хидрофобността на модифицирания пептид. Ако модифицираният пептид е твърде кратък, може да има проблеми в синтеза. Първият проблем е, че синтезираният модифициран пептид има определени трудности в процеса на след обработка. Модифицираният пептид в рамките на 5 пептида обикновено има хидрофобни аминокиселини, в противен случай след обработката е труден. Модифицираните пептиди под 15 аминокиселинни остатъка обикновено могат да бъдат получени със задоволителен добив и добив.

Някои въпроси и отговори за разтворимостта на модифицираните пептиди

4. Как да преценя разтворимостта на модифицирания пептид от последователността?

(1) Модифицираният пептид, съдържащ висок дял от хидрофобни аминокиселини като Leu, Val, Iie, Met, Phe и Trp, не са лесно разтворими във воден разтвор или почти неразтворими. Тази аминокиселина може да бъде проблематична или при пречистване, или в синтеза.

(2) the proportion of hydrophobic amino acids under normal conditions < The proportion of charged amino acids can reach up to 20%. If the N or C of the modified peptide is short, the increase of polar amino acids can also improve the solubility.

5. Защо е трудно да се синтезира Cys, Met или TRP?

A: Модифицирани пептиди, съдържащи Cys, Met или Trp, не могат да бъдат синтезирани и продуктите с висока чистота са трудни за получаване. Това се дължи главно на факта, че тези групи са по -малко стабилни и са склонни към окисляване. Използването и съхранението на тези модифицирани пептиди изисква специална грижа, за да се предотврати многократното отваряне на капака.

6, Защо някакъв синтетичен добив или чистота ще бъде много нисък?

О: Съществува значителна разлика между синтеза на модифицирани пептиди и синтеза на праймери. Има много малко праймери, които не могат да бъдат синтезирани, но често има модифицирани пептиди, които не могат да бъдат синтезирани. Като Val, Ile, Tyr и Trp, Leu, Phe, Gln и Thr аминокиселина в близост или контур, модифицираните пептиди не могат да се разтягат, разтворени в процеса на синтез, синтетичната ефективност е по -ниска. Ефективността на синтеза и чистотата на продукта са много ниски в следните случаи, като: Повторете Pro, Ser-Ser, Repeat ASP, четири последователни GLY и т.н.

7. Как се пречиства?

A: Модифицираните пептиди обикновено се пречистват чрез колона с обърната фаза (като C8, C18 и др.) При 214nm. Буферната система обикновено е решение, съдържащо TFA, Ph2.0. Buffera съдържа 0,1%Tfainddh2O, а BufferB съдържа 1%TFA/ACN/PH2.0. Той се разтваря в Буфера преди пречистване; Ако разтворът не е задоволителен, разтворете се с буферб, тогава се разредете с Buffera; За силно хидрофобни модифицирани пептиди, понякога се добавя малко меряния или оцетна киселина.