В биологичните изследвания обикновено се използват полипептиди с дълга последователност. За пептиди с повече от 60 аминокиселини в последователността генната експресия и SDS-PAGE обикновено се използват за получаването им. Този метод обаче отнема много време и ефектът на разделяне на крайния продукт не е добър.

Предизвикателства и решения за синтез на дълъг пептид

В синтеза на дълги пептиди винаги сме изправени пред проблем, тоест стеричната пречка за реакцията на кондензация се увеличава с увеличаването на последователността в синтеза и времето на реакция трябва да се коригира, за да се направи реакцията завършена. Колкото по -дълго обаче е времето на реакция, толкова повече странични ефекти се получават и се образува част от целевия пептид. Такива остатъци - дефицитни пептидни вериги са ключови примеси, произведени в синтеза на дълъг пептид. Следователно, в синтеза на дълъг пептид, ключовият проблем, който трябва да преодолеем, е да проучим висококачествените реакционни условия и методите на реакция, така че да направим реакцията на кондензация на аминокиселини по -изчерпателна и пълна. В допълнение, намалете времето за реакция, тъй като колкото по-дълго е времето на реакция, толкова по-неконтролируеми странични реакции, толкова по-сложни са страничните продукти. Следователно, следните три точки са обобщени:

Може да се използва микровълнов синтез: За някои аминокиселини, срещани в процеса на синтез, които не са лесни за интегриране, може да се използва микровълнов синтез. Този метод има забележителни резултати и значително намалява времето за реакция и намалява образуването на два ключови странични продукти.

Може да се използва метод за синтез на фрагмент: Когато някои пептиди са трудни за синтез чрез общи методи за синтез и не са лесни за пречистване, можем да приемем цялата кондензация на няколко аминокиселини в определен сегмент от пептида към пептидната верига като цяло. Този метод може също да реши много проблеми в синтеза.

Може да се използва синтез на ацилхидразид: Ацилхидразидният синтез на пептиди е метод за синтез на твърда фаза на N-терминалния Cys пептид и С-терминална полипептидна хидразидна химична селективна реакция между образуването на амидни връзки за постигане на метод на пептидна връзка. Въз основа на позицията на CYS в пептидната верига, този метод разделя цялата пептидна верига на множество последователности и ги синтезира съответно. Накрая, целевият пептид се получава чрез реакция на кондензация на течна фаза. Този метод не само значително намалява времето за синтез на дълъг пептид, но също така значително увеличава чистотата на крайния продукт.

Дълго пептидно пречистване

Спецификата на дългите пептиди неизбежно води до сложни компоненти на суровите пептиди. Следователно, предизвикателство е също да се пречистят дългите пептиди от HPLC. Амилоидна серия от процеса на пречистване на полипептиди, поглъщайки много опит и успешно се използва при пречистването на дългия пептид. Чрез приемането на ново оборудване, смесването на множество системи за пречистване, многократно разделяне и други методи на опит, успеваемостта на дългите пептидни пречистване беше значително подобрена.