Преглед на протеиновата експресия

Proteinexpression се отнася до технологията за възпроизвеждане на целевия ген в изкуствен вектор и след това го въвежда в реципиентната клетка или безклетъчна система, за да експресира протеина в хетероложна система.

Експресията на протеини може да реши проблема, който местните протеини са трудни за получаване. След първото установяване на хетероложна експресия на протеин през 70 -те години на миналия век, хиляди рекомбинантни протеини са успешно експресирани, което ефективно насърчава непрекъснатото развитие на биотехнологиите и биомедицинските изследвания и индустрията.

Цел:

Чрез експресията на протеин първо е възможно да се получат протеини, които са трудни за получаване от естествени източници.

Второ, голямата партида и високата чистота на продуктите за експресия на протеин не само улесняват анализа на целевия протеин, но и значително намаляват разходите.

По -важното е, че рекомбинантните протеини обикновено се избират, за да показват висока биологична безопасност на клетката гостоприемник, като по този начин се избягват някои потенциални рискове за биологична безопасност на патогенния гостоприемник.

Метод:

Той включва главно процесите на репликация на генния фрагмент, въвеждане в експресионната система, индуцирана експресия, пречистване на продукта и анализ.

Преглед на протеиновата експресия

Класификация:

Системите за експресия на протеин обикновено могат да бъдат разделени на:

1. Система за ядрена експресия: Escherichia coli е най -често срещаната система за експресия на протеини, която има предимствата на ясния генетичен произход, удобно възпроизвеждане, ниска цена и висока експресия. Въпреки това, той липсва механизъм за модификация на превод и не е подходящ за разцепване на гликозилиране или специална точка на селекция за промяна на експресията на протеина. Bacillus subtilis също може да се използва за експресия на протеин и неговите предимства са силна способност за метаболитна експресия и ниска протеазна активност, която постепенно привлича вниманието.

2. Еукариотна експресионна система: Определена степен на гликозилиране може да бъде постигната след превод, което е по -близо до естествената активност на еукариотичните протеини. Тя е включена главно. ① Система за експресия на дрожди (обикновена червена мая, пивоварна мая и т.н.), дрождите могат да бъдат меки с висока плътност, могат да бъдат модифицирани след превод, има предимствата на прокариотичните и еукариотните клетки на гостоприемника и също е добра система за експресия на протеини. ② Система за експресия на клетки на насекоми: Екзогенните гени се трансфектират в клетки от насекоми чрез бакуловирусен вектор за експресия. Това е система с висока експресия за еукариотни протеини, която е подходяща за мембранни протеини, макромолекулярни протеини, протеин кинази и други протеини, които са трудни за експресия в прокариотичната система. ③ Система за експресия на клетъчни бозайници: Ефективността на транслацията и декорацията на клетките на бозайниците е много по -висока от тази на клетъчните системи за дрожди и насекоми. Структурата и функцията на клетките на бозайниците са по -близки до местните еукариотни протеини, но нивото на експресия е ниско и цената е висока.

3. Система за експресия без клетки: Целевите протеини могат да бъдат експресирани директно от частици и PCR продукти, а експресионната система е безклетъчни екстракти от Escherichia coli, пшенични ембриони, ретикулоцити на заек и др. Предимствата на безклетъчната експресия на протеин са способността да се изразяват продукти, които са трудни за изразяване в други системи, висока пропускателна способност и автоматизация, но ниска експресия и високи разходи.