Най-податливи на HPLC неуспехи и решения

Като инструмент с висока точност HPLC може лесно да доведе до някои неприятни малки проблеми, ако не се работи по правилния начин по време на употреба.Един от най-често срещаните проблеми е проблемът с компресията на колоните.Как бързо да отстраните дефектен хроматограф.HPLC системата се състои основно от бутилка с резервоар, помпа, инжектор, колона, температурна камера на колоната, детектор и система за обработка на данни.За цялата система стълбовете, помпите и детекторите са ключовите компоненти и основните места, които са податливи на проблеми.

Ключът към налягането в колоната е зоната, която изисква голямо внимание при използване на HPLC.Стабилността на налягането в колоната е тясно свързана с формата на хроматографския пик, ефективността на колоната, ефективността на разделяне и времето на задържане.Стабилността на налягането в колоната не означава, че стойността на налягането е стабилна при стабилна стойност, а по-скоро че диапазонът на колебание на налягането е между 345kPa или 50PSI (позволяващо използването на градиентно елуиране, когато налягането в колоната е стабилно и бавно се променя).Твърде високото или твърде ниското налягане е проблем с налягането в колоната.

Най-податливи на HPLC неуспехи и решения

1, високото налягане е най-честият проблем при използването на HPLC.Това означава внезапно повишаване на налягането.Като цяло има следните причини: (1) Като цяло това се дължи на запушване на канала на потока.На този етап трябва да го разгледаме на части.а.Първо отрежете входа на вакуумната помпа.В този момент PEEK тръбата беше пълна с течност, така че PEEK тръбата да беше по-малка от бутилката с разтворител, за да се види дали течността капе по желание.Ако течността не капе или капе бавно, филтърната глава на разтворителя е блокирана.Лечение: Накиснете в 30% азотна киселина за половин час и изплакнете със свръхчиста вода.Ако течността капе произволно, филтърната глава на разтворителя е нормална и се проверява;b.Отворете клапана за продухване, така че подвижната фаза да не преминава през колоната и ако налягането не се намали значително, бялата глава на филтъра е блокирана.Лечение: Филтрираните бели точки бяха отстранени и обработени с ултразвук с 10% изопропанол за половин час.Ако приемем, че налягането падне под 100PSI, филтрираната бяла глава е нормална и се проверява;° С.Отстранете изходния край на колоната, ако налягането не намалее, колоната е блокирана.Лечение: Ако е запушване с буферна сол, изплакнете 95%, докато налягането се нормализира.Ако препятствието е причинено от някакъв по-силно запазен материал, трябва да се използва по-силен поток от настоящата подвижна фаза, за да се ускори към нормалното налягане.Ако дългосрочното почистващо налягане не намалее съгласно горния метод, входът и изходът на колоната могат да се считат за свързани с инструмента, напротив, и колоната може да бъде почистена с подвижната фаза.По това време, ако налягането на колоната все още не е намалено, входната ситова плоча на колоната може да бъде сменена само, но след като операцията не е добра, е лесно да доведе до намаляване на ефекта на колоната, така че опитайте да използвате по-малко.При трудни проблеми може да се обмисли подмяна на колоната.

(2) Неправилна настройка на дебита: Правилният дебит може да бъде нулиран.

(3) Неправилно съотношение на потока: индексът на вискозитет на различните пропорции на потоците е различен и съответното системно налягане на потока с по-висок вискозитет също е по-голямо.Ако е възможно, разтворителите с по-нисък вискозитет могат да бъдат заменени или пренастроени и подготвени.

(4) Дрейф на нулата на налягането в системата: регулирайте нулата на сензора за ниво на течността.

2, налягането е твърде ниско (1) обикновено се причинява от изтичане на системата.Какво да направите: Намерете всяка връзка, особено интерфейса в двата края на колоната, и затегнете зоната на теча.Отстранете стълба и затегнете или облицовайте PTFE филма с подходяща сила.

(2) Газът влиза в помпата, но налягането обикновено е нестабилно в този момент, високо и ниско.По-сериозно, помпата няма да може да абсорбира течността.Метод на третиране: отворете почистващия вентил и почистете при скорост на потока 3~5 ml/min.Ако не, въздушните мехурчета се аспирират от изпускателния клапан с помощта на специална иглена тръба.

(3) Няма изтичане на подвижна фаза: проверете дали има подвижна фаза в бутилката с резервоара, дали мивката е потопена в подвижната фаза и дали помпата работи.

(4) Еталонният клапан не е затворен: референтният клапан е затворен след забавяне.Обикновено пада до 0,1.~ 0,2 ml/min след затваряне на референтния клапан.

Резюме:

В тази статия се анализират само често срещани проблеми в течната хроматография.Разбира се, в нашето практическо приложение ще срещнем повече други проблеми.При обработката на грешки трябва да следваме следните принципи: променяйте само един фактор наведнъж, за да определите връзката между хипотетичния фактор и проблема;Като цяло, когато подменяме части за отстраняване на неизправности, трябва да обърнем внимание на поставянето на демонтираните непокътнати части обратно на място, за да предотвратим отпадъци;Формирането на добър навик за записване е ключът към успеха при справяне с грешки.В заключение, когато използвате HPLC, е важно да обърнете внимание на предварителната обработка на пробата и правилната работа и поддръжка на оборудването.