Рекомбинантните протеинови антигени често имат няколко различни епитопа, някои от които са епитопи на последователността, а други са структурни епитопи. Поликлоналните антитела, получени чрез имунизиране на животни с денатурирани антигени, са смеси от антитела, специфични за отделни епитопи и могат да бъдат използвани като цяло за откриване на естествени структури или денатурирани целеви протеини. Странично предимство от използването на денатурирани протеини като имуногени е, че денатурираните протеини са склонни да бъдат по -имуногенни и могат да стимулират силен имунен отговор при животни.
Експресионната система на Escherichia coli обикновено се избира за антигенни цели, тъй като е най -скъпата система по отношение на времето и парите. За да се подобри възможността за експресията на целевия протеин и удобството на пречистване, понякога се изразява само малък фрагмент от целевия протеин, като специфичен домейн.
Триизмерната структура на протеините
Специфичният домейн на протеин
Ако целта на приготвянето на антитела е единствено за откриване на WB, е икономично и бързо да се използва синтетичен малък пептид като антиген, но съществува риск от слаба имуногенност или нерегеничност поради неподходящ подбор на пептиден сегмент. Тъй като подготовката на антитела изисква дълъг период, често се избират два или три различни пептидни сегмента за приготвяне на антитела, използвайки полипептиден антиген, за да се гарантира успеваемостта на експеримента.
Чистотата на полипептидния антиген за имунизация е необходима да бъде по -голяма от 80%. Въпреки че по-високата чистота може теоретично да получи антитела с по-добра специфичност, на практика животните винаги произвеждат голям брой неспецифични антитела, като по този начин маскират ползите от чистотата на антиген.
В допълнение, приготвянето на антитела от малки пептиди трябва да бъде омрежено към подходящия носител антиген, за да се засили имуногенността му. Два често срещани антигенни носители са KLH и BSA.
Време за публикация: 2025-07-03