Рекомбинантните протеинови антигени често имат няколко различни епитопа, някои от които са последователни епитопи, а други са структурни епитопи.Поликлоналните антитела, получени чрез имунизиране на животни с денатурирани антигени, са смеси от антитела, специфични за отделни епитопи и могат да се използват като цяло за откриване на естествени структури или денатурирани целеви протеини.Странична полза от използването на денатурирани протеини като имуногени е, че денатурираните протеини са склонни да бъдат по-имуногенни и могат да стимулират силен имунен отговор при животните.
Експресионната система на Escherichia coli обикновено се избира за антигенни цели, тъй като е най-скъпата система по отношение на време и пари.За да се подобри възможността за експресия на целевия протеин и удобството на пречистването, понякога се експресира само малък фрагмент от целевия протеин, като например специфичен домен.
Триизмерната структура на протеините
Специфичният домейн на протеин
Ако целта на подготовката на антитела е единствено за откриване на wb, икономично и бързо е да се използва синтетичен малък пептид като антиген, но съществува риск от слаба имуногенност или нерегенност поради неподходящ избор на пептиден сегмент.Тъй като подготовката на антитела изисква дълъг период, два или три различни пептидни сегмента често се избират за получаване на антитела, използвайки полипептиден антиген, за да се гарантира степента на успех на експеримента.
Изисква се чистотата на полипептидния антиген за имунизация да бъде по-голяма от 80%.Въпреки че теоретично с по-висока чистота могат да се получат антитела с по-добра специфичност, на практика животните винаги произвеждат голям брой неспецифични антитела, като по този начин маскират ползите от чистотата на антигена.
В допълнение, получаването на антитела от малки пептиди трябва да бъде кръстосано свързано с подходящия антиген-носител, за да се подобри неговата имуногенност.Два често срещани антигенни носители са KLH и BSA.
Време на публикуване: 23 март 2023 г