Флуоресцентно резонансно пренос на енергия (FRET)
Флуоресцентно резонансно пренос на енергия (FRET) е нерадиационен процес на пренос на енергия, при който енергията на донора, възбудена от състоянието, се прехвърля в възхитителното възбудено състояние чрез взаимодействие на междумолекулни електрически двойки. Този процес не включва фотони и следователно не е радиационен. Този анализ има предимствата да бъдеш бърз, чувствителен и прост.
Багрилото, използвано в теста на FRET, може да бъде идентично. Но в повечето приложения всъщност се използват различни багрила. Накратко, прехвърлянето на светеща резонансна енергия е прехвърлянето на двойка диполи от донора (багрило 1) на акцептора (багрило 2), когато групата донори се вълнува. Като цяло, емисионният спектър на донорната флуорофорна група се припокрива с абсорбционния спектър на акцепторната група. „Когато разстоянието между двата флуорофора е подходящо (10 - 100 A), може да се наблюдава прехвърляне на флуорофорна енергия от донора към акцептора.“ Методът на пренос на енергия зависи от химическата структура на рецептора:
1. Се преобразува в молекулярна вибрация, тоест светещата светлина на трансфера на енергия изчезва. (Рецепторът е светлинен гасител)
2. Емисиите са по -интензивни от самия рецептор, което води до червено изместване в вторичния флуоресцентен спектър. " (Рецепторите са светещи излъчватели).
Групата на донорната група (EDANS) и акцепторният ген (DABCYL) са равномерно свързани с естествения субстрат на ХИВ протеазата и когато субстратът не е изключен, дабцил може да се откаже от еданите и след това да стане неоткриваем към флуор. При прекъсване на протеазата HIV-1, Edans вече не се гаси от DABCYL и впоследствие могат да бъдат открити луциферази на едан. Наличието на протеазни инхибитори може да бъде наблюдавано чрез промени в интензитета на флуоресценция на еданите.
FRET пептидите са удобни инструменти за изследване на неспецифичността на пептидазата. Тъй като неговият реакционен процес може да бъде непрекъснато наблюдаван, той осигурява удобен метод за откриване на ензимна активност. Шиерът, произведен след хидролизата на пептидни връзки от донора/акцептора, осигурява мярка за ензимна активност при наномоларни концентрации. Когато FRET пептидът е непокътнат, той показва внезапно изчезване на вътрешната светкавица, но когато всяка пептидна връзка срещу донора/акцептора се счупи, той освобождава светкавица, която може да бъде открита непрекъснато и след това ензимната активност може да бъде количествено определена.
Време за публикация: 2025-07-02